Reactivo ELISA para HIV 1/2 Ag/Ab

HIV 1&2 Ag/Ab

Contenido

Z04380 96

-1 Microplaca: 96 pocillos (12 tiras de 8 pocillos recubiertas de antígeno y anticuerpo, desprendibles individualmente)

-1x 1 mL Control positivo de anticuerpo I (VIH 1)

-1x 1 mL Control positivo de anticuerpo II (VIH 2)

-1x 1 mL Control positivo de antígeno

-1x 1 mL Control negativo

-1x 12 mL Conjugado enzimático

-1x 3 mL Conjugado de biotina

-1x 6 mL Solución de sustrato A

-1x 6 mL Solución de sustrato B

-1x 6 mL Solución de parada

-1x 50 mL Tampón de lavado

-3 Tapas de cartón para placas

-1 Bolsa de plástico

-1 Prospecto

-1 Certificado de análisis

USO PREVISTO

HIV 1&2 Ag/Ab es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) destinado a la detección cualitativa de antígenos y/o anticuerpos contra el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) tipo 1 (grupo M - O) y/o tipo 2 en muestras de suero o plasma humano. El método también se conoce como ELISA de cuarta generación para la detección del VIH. El kit está destinado a la detección de donantes de sangre y como ayuda en el diagnóstico de afecciones clínicas relacionadas con la infección por VIH-1 y/o VIH-2, los agentes etiológicos del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA).

SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO

Los virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2 son los agentes etiológicos del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El VIH se ha aislado de pacientes con SIDA, complejo relacionado con el SIDA (ARC) y de individuos sanos con alto riesgo de SIDA. La infección por VIH va seguida de una enfermedad aguda similar a la gripe. Esta fase puede pasar desapercibida y la relación con la infección por VIH puede no estar clara en muchos casos. La fase aguda suele ir seguida de un estado de portador asintomático, que progresa al SIDA clínico en aproximadamente el 50% de los individuos infectados en los 10 años siguientes a la seroconversión. La evidencia serológica de la infección por VIH puede obtenerse mediante la prueba de la presencia de antígenos o anticuerpos del VIH en el suero de individuos sospechosos de infección por VIH. Los antígenos pueden detectarse generalmente durante la fase aguda y la fase sintomática del SIDA solamente. Los anticuerpos contra el VIH-1 y/o el VIH-2 pueden detectarse durante prácticamente todo el período de infección, comenzando en la fase aguda o poco después y durando hasta la etapa final del SIDA. Aparte de la transmisión sexual, la principal vía de infección por VIH es la transfusión sanguínea. El VIH puede estar presente tanto en fracciones celulares como libres de células de la sangre humana. Por lo tanto, todas las donaciones de sangre o plasma deben analizarse debido al riesgo de transmisión del VIH a través de sangre contaminada.

Las pruebas ELISA para la detección de la infección por VIH se caracterizan por una alta sensibilidad, especificidad y un procedimiento de operación simple. Existen pruebas más adecuadas para analizar grandes cantidades de muestras y, en la actualidad, hay cientos de pruebas de VIH disponibles a nivel internacional que se utilizan en el cribado sanguíneo de rutina o en el diagnóstico clínico. Desde que se introdujeron comercialmente las primeras pruebas ELISA de VIH en 1985, se han desarrollado cuatro generaciones. Los tests de primera generación se basaban en antígenos de lisados virales derivados de virus que se cultivan en líneas de linfocitos T humanos. La presencia de trazas de componentes de células huésped en las que se han propagado los viriones podía dar lugar a una contaminación cruzada y, por tanto, a tasas muy elevadas de resultados falsos positivos. Con la clonación del genoma del VIH, se dispuso rápidamente de ensayos mejorados basados en proteínas recombinantes y/o péptidos sintéticos (conocidos como de segunda generación). La utilización de métodos biotecnológicos permite la expresión predominante de las regiones inmunorreactivas importantes de las proteínas y también permitió la producción de ensayos combinados de VIH-1/VIH-2. El antígeno recombinante también podía producirse con mucha más pureza y en grandes cantidades, y se puede unir a la superficie de la fase sólida con un control mucho más estricto de las proporciones y concentraciones de proteínas. Los kits de VIH de primera y segunda generación se basaban en el método ELISA indirecto y podían detectar anticuerpos IgG solo mediante anticuerpos anti-IgG humanos marcados con enzimas. La tercera generación de ELISA utiliza el método de “sándwich” de doble antígeno: nuevamente con antígenos recubiertos en placas de poliestireno en fase sólida, pero con la detección de anticuerpos lograda con la ayuda de otro antígeno marcado con enzima. Los ensayos de tercera generación pueden detectar todos los anticuerpos en la muestra (IgG, IgM, etc.), lo que aumenta significativamente la sensibilidad del ensayo en comparación con las generaciones anteriores. Además, la detección de anticuerpos IgM que están presentes solo durante las primeras etapas de la infección, acorta mucho el período de “ventana” de detección de anticuerpos (el período de tiempo en el que no hay producción de anticuerpos detectables) y, en comparación con la segunda generación, las pruebas “sándwich” pueden detectar anticuerpos 11 días antes. Para reducir aún más el período de “ventana” de detección de anticuerpos, se han desarrollado pruebas ELISA de VIH de cuarta generación que pueden detectar simultáneamente antígenos de VIH (p24) y anticuerpos y están disponibles comercialmente desde 1998. Con la detección de p24, las pruebas de cuarta generación acortan el período de “ventana” a 16 días, o en comparación con la tercera generación, la infección por VIH podría detectarse 8 días antes.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA

La prueba ELSIA DIALAB HIV 1&2 Ag/Ab es un kit de inmunoensayo enzimático de incubación en dos pasos, en formato “sándwich”, que utiliza tiras de micropocillos de poliestireno recubiertas previamente con antígenos recombinantes del VIH (gp41, gp120 recombinantes del VIH-1 y gp36 recombinantes del VIH-2) y anticuerpos anti-VIH (p24). Como primer paso, se añaden a los pocillos los anticuerpos anti-VIH (p24) biotinilados junto con la muestra de suero o plasma del paciente. Durante la incubación, los anticuerpos específicos del VIH-1/2, si están presentes en la muestra, se capturarán dentro de los pocillos. Simultáneamente, si el antígeno p24 del VIH está presente en la muestra, también se capturará como un complejo de “sándwich” de doble anticuerpo que comprende los anticuerpos recubiertos, p24 y anticuerpos biotinilados. A continuación, se lavan los micropocillos para eliminar las proteínas séricas no unidas. La detección del complejo de anticuerpo biotinilado con antígeno p24 del VIH capturado o de los anticuerpos del VIH-1/2 se logra durante el segundo paso de incubación mediante la adición de la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP), que se ha conjugado con los segundos antígenos recombinantes del VIH 1+2 y con avidina.

Detección de p24: cuando se ha capturado p24 dentro de los pocillos, la avidina reaccionará con la biotina y unirá HRP al complejo Ab-p24-Ab.

Detección de anticuerpos del VIH 1 y 2: cuando se han capturado anticuerpos del VIH-1/2 dentro de los pocillos, los antígenos conjugados con HRP se unirán a los anticuerpos capturados formando un inmunocomplejo tipo “sándwich” Ag-Ab-Ag (HRP). Los micropocillos se lavan para eliminar el conjugado no unido y se añaden soluciones de cromógeno a los pocillos. En los pocillos que contienen inmunocomplejos tipo “sándwich” Ag-Ab-Ag (HRP) y/o Ab-p24-Ab (HRP), los cromógenos incoloros son hidrolizados por la HRP unida a un producto de color azul. El color azul se torna amarillo después de detener la reacción con ácido sulfúrico. La intensidad del color se puede medir y es proporcional a la cantidad de anticuerpos o p24 capturados en los pocillos y a la muestra, respectivamente. Los pocillos que contienen muestras negativas para anti-VIH-1/2 o p24 permanecen incoloros.